ক্লোরোফিল হল একটি সবুজ রঙ্গক যা উচ্চতর গাছপালা এবং অন্যান্য সমস্ত সালোকসংশ্লেষী জীবে পাওয়া যায়। ক্লোরোফিল A এবং ক্লোরোফিল B ইথানল, ইথার এবং অ্যাসিটোন এবং অন্যান্য দ্রাবকগুলিতে দ্রবণীয়, জল এবং পেট্রোলিয়াম ইথারে দ্রবণীয়, তাই ক্লোরোফিল নিষ্কাশন করতে মেরু দ্রাবক যেমন অ্যাসিটোন, মিথানল, ইথানল, ইথাইল অ্যাসিটেট ইত্যাদি ব্যবহার করতে পারে।
ক্লোরোফিল নিষ্কাশন প্রক্রিয়া:
ক্লোরোফিল নিষ্কাশন একটি আধা-অন্ধকার ঘরে 25 ডিগ্রি সেলসিয়াসে প্রস্তুত করা হয়। নিষ্কাশনের ধাপগুলি নিম্নরূপ:
(1) 1000 গ্রাম তাজা সবুজ পাতা নিন এবং একটি Wechsler এ গুঁড়ো করুন।
(2) নিষ্কাশনের জন্য 1000 গ্রাম সবুজ পাতাগুলিকে অল্প পরিমাণে ক্যালসিয়াম কার্বনেট (তাপমাত্রা 20 ডিগ্রি) সহ অ্যাসিটোনে রাখুন, যতক্ষণ না ফিল্টারিং এবং পরিষ্কার করার পরে পাতার টুকরো বর্ণহীন হয়।
(3) ফিল্টার করা অ্যাসিটোন নির্যাসটি 1 লিটার পেট্রোলিয়াম ইথার এবং 100 মিলি অ্যাসিটোন ধারণকারী একটি ফানেলে রাখুন, এবং তারপর স্তরিত হওয়া পর্যন্ত পাতিত জল যোগ করার সময় আলতোভাবে ঘোরান। পানির স্তরে অ্যাসিটোন এবং জল-দ্রবণীয় অমেধ্যগুলির বেশিরভাগই ফেলে দেওয়া হয়, শুধুমাত্র পেট্রোলিয়াম ইথার দ্রবণ রেখে যায়।
(4) পেট্রোলিয়াম ইথার দ্রবণটি পাতিত জল দিয়ে আবার শুদ্ধ করার পরে, এটি 200ml80 শতাংশ মিথানল দ্রবণ সহ পেট্রোলিয়াম ইথার এবং 0.01g অক্সালিক অ্যাসিড দিয়ে 5 বারের বেশি পরিষ্কার করা হয় এবং অবশেষে হলুদ-সবুজ সাসপেনশন পাওয়া যায় .
(5) অ্যানহাইড্রাস সোডিয়াম সালফেট দিয়ে সাসপেনশনটি শুকিয়ে নিন এবং এটি 3 সেমি পুরু সুক্রোজ পাউডার দিয়ে তৈরি একটি কলামে প্রবেশ করুন। তারপর ক্যারোটিনয়েডগুলি অপসারণ করতে এবং তাদের মধ্যে শুধুমাত্র প্রাকৃতিক ক্লোরোফিল ধারণ করার জন্য দ্রুত রঙ্গকগুলি পরিষ্কার করুন।
(6) প্রাকৃতিক ক্লোরোফিল ধারণকারী সুক্রোজ কলাম দুটি স্তরে বিভক্ত, সবুজ স্তরটিতে রয়েছে 4-10মিমি ক্লোরোফিল বি স্তর, অন্য নীল স্তরটি হল 2-6মিমি ক্লোরোফিল এ স্তর।
(7) নীল স্তরের মাঝখানে অবস্থিত অংশটি (নীল স্তরের প্রায় অর্ধেক) ইথারে রাখা হয়, সাসপেনশনটি ফিল্টার করা হয় এবং নিষ্কাশন করা হয়, পাতিত জল দিয়ে পরিষ্কার করা হয়, সোডিয়াম সালফেট দিয়ে শুকানো হয় এবং ক্লোরোফিল পাওয়ার জন্য পাত্রে ফিল্টার করা হয়। ক.
(8) (6) মধ্যে সবুজ স্তরের মাঝের অংশটি সরান এবং ক্লোরোফিল বি ইথার দ্রবণ তৈরি করতে ফিল্টারিং এবং ধোয়ার জন্য দ্রুত ইথারে রাখুন।
নিষ্কাশন সময় পৃথক কিভাবে?
ক্রোমাটোগ্রাফি জৈব যৌগের পৃথকীকরণ, পরিশোধন এবং সনাক্তকরণের জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ পদ্ধতি, বিশেষ করে মাইক্রোঅ্যানালাইসিসে ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয়। ফল ও সবজির রঙ্গক প্রধানত চর্বি-দ্রবণীয় ক্যারোটিন, লুটেইন, ক্লোরোফিল এবং জলে দ্রবণীয় অ্যান্থোসায়ানিন অন্তর্ভুক্ত। নিষ্কাশন পরীক্ষায়, আমরা অনুরূপ মিসসিবিলিটি জল-দ্রবণীয় অ্যান্থোসায়ানিন ফিল্টারিংয়ের নীতি ব্যবহার করতে পারি, যার ফলে পাতলা-স্তর ক্রোমাটোগ্রাফি, কলাম ক্রোমাটোগ্রাফি, উচ্চ কার্যকারিতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (এইচপিএলসি) ব্যবহার করে বিটা-ক্যারোটিন, লুটেইন আলাদা করা যায়। এবং ক্লোরোফিল, তিন ধরনের পিগমেন্টের মেরুত্বের কারণে দুর্বল, যথাযথভাবে একক জৈব দ্রাবক বা মিশ্র দ্রাবকের ভিন্ন অনুপাতকে সম্প্রসারণ এজেন্ট এবং ইলুশন এজেন্ট হিসাবে বেছে নিতে পারে, সর্বোত্তম বিচ্ছেদ শর্ত নির্ধারণ করা হয়েছিল।
